迄今为止，湿疣的诊断方法越来越多，其中就包括基因诊断，其主要是实验诊断技术是核酸杂交。近年来发展的PCR方法具有特异、敏感、简便、快速等优点,为HPV检测开辟了新途径。下面具体介绍湿疣基因诊断的方法是什么。
(一)标本的采集及处理
1.标本的采集和预处理：用刮板或生理盐水浸润的棉棒从阴道和宫颈外口取分泌物和细胞。在作细胞学检查的同时，将标本放入5ml含有0.05%硫柳汞的 PBS中，用PBS离心(3000g，10min)洗涤2次，沉积细胞重悬于1mlPBS中，取0.5ml细胞悬液抽提。
2.标本核酸的提取：按1体积细胞悬液加10倍体积的细胞裂解液(10mmol/LTris-HCl,pH7.4，10mmol/LEDTA，150mmol /LNaCl,0.4%SDS，1.0mg/ml蛋白酶K)37℃下处理过夜。且等体积酚/氯仿(1:1)，氯仿/异戊醇(24:1)各抽提2次。加1 /10体积3mol/LNaAc(pH5.2)及2.5倍体积无水乙醇置-20℃2h或过夜沉淀DNA。加1体积乙醇洗涤1次。用60μl含RNA酶 (100μg/ml)的TE液(10mmol/L Tris-HCl，pH8.0，1.0mmol/LEDTA)溶解DNA，37℃温育。
(二)PCR扩增
1.引物设计和合成：HPV基因组可分为早期区(E)和晚期区(L)，每区含一系列开放读码框架(ORF)。序列分析表明，各型HPV的非编码区及 E1、E6、E7和L1区均有保守序列。Manos等从HPVL1区中选择保守序列设计合成引物MY11和MY09见表1,该引物与HPV6、11、 16、18及33型有互补序列，也可扩增其它型。
2.PCR反应试剂：Taq DNA聚合酶(2U/ml)、10mmol/L dNTP贮备液(dATP、dCTP、dGTP、dTTP各10mmol/L)，10×PCR缓冲液(500mmol KCl、40mmol/L MgCl2、100mmol/L Tris-HCl、pH 8.5)，100μmol/L MY11和MY09贮备液，灭菌的玻璃蒸馏器制备的蒸馏水。
3.PCR扩增方法和程序：以100μl PCR反应液,用无菌0.5ml硅化塑料离心管为反应管进行扩增反应。
(1)实验前配制预混反应试剂并分装。预混反应试剂包括除标本DNA外的其它各种PCR反应试剂。每支反应管中含有的PCR反应试剂。
(2)各反应管依次加入10μl标本和90μl预混反应试剂。
(3)加入80-100μl石蜡油，在台式离心机上快速离心数秒钟，使各反应试剂收集于油层下。目前，PCR试剂已商品化，反应体积为25μl。使用时只加入标本DNA即可。
(4)将反应管置PCR扩增仪上，循环参数为95℃ 30s，55℃ 40s，72℃ 50s循环35次，最后72℃延伸5min。
4.每次试验应设阳性及阴性对照。以载有HPV的重组质粒(每反应为100pg)或含有HPV的细胞系(如癌ski、HeLa)DNA为阳性对照，以无HPV的人细胞系DNA为阴性对照。
(三)扩增产物的检测和分析
1.凝胶电泳：扩增反应结束后，取出反应管，冷却至室温，取10μl扩增产物用5%-7%聚丙烯酰胺凝胶或1.5%琼脂糖电泳，溴化乙锭染色，紫外分析仪下分析结果，分子量约为450bp处出现明显的DNA带。
2.核酸杂交：如果凝胶电泳无清楚的DNA或需确定DNA带的特异性时，可用标记的公用混合探针和(或)型特异探针作Southern吸印杂交、斑点杂交验证。
按照标准方法制32P ATP标记的寡核苷酸探针，需达到约107cpm/pmol特异活性。杂交液中需含有2×106-5×106cpm探针/ml。在55℃缓慢振荡下杂交 2-3h，随后于30-55℃下用洗涤液(2×SSC、0.1%SDS)迅速冲洗杂交膜，除去多余探针。然后进行洗膜，其条件依所用探针而异：公用混合探针，55℃洗膜10min。MY12、MY13及MY16探针，56-57℃下10min，并换液重洗1次。MY14及WD74探针，58-59℃下 10min，亦换液重洗1次。
用PCR方法检测HPV比核酸杂交方法优越。其敏感性高，GP-PCR方法以凝胶电泳直接分析结果，可检出标本中200个拷贝的HPV DNA，若以核酸杂交检测PCR产物，敏感性提高，能检出10个拷贝的HPV DNA。
