大家都知道，检查对于疾病有着很深刻的意义，对我们的身体健康程度会作出一个判定，对于大肠癌患者也是一样，下面我们就来看看大肠癌的各项检查过程是什么，希望可以对广大的大肠癌患者有所帮助。

　　一、端粒酶活性检查过程

　　1.检查操作：基因组DNA为0.1μg;缓冲液含50mmol/L氯化钾，10mmol/L Tris-HCl(pH8.4)，1.5mmol/L氯化镁，100μg明胶;每一引物为0.25μmol/L;dATP，dCTP，dGTP，dTIP各为200μmol/L;DNA聚合酶为2.5U，终体积为100μl。加数滴液体石蜡防止蒸发。

　　2.反应周期：变性为90℃ 30～60s;引物和模板的退火温度为40～60℃ 30～60s;延伸为72℃ 1～2min。经反复循环30～40次，最后1次72℃引物延伸7min后终止。除去液体石蜡后，产物可供分析。经琼脂糖凝胶电泳后，用溴乙锭染色，经紫外灯照射可见预料扩增长度的荧光条带。产物也可与放射标记或非放射标记的寡聚核苷酸探针行Southern印迹杂交或点渍印迹杂交。如用PCR自动仪则更为方便，将反应试剂、DNA模板及Taq-DNA聚合酶加入试管后，放进已调好程序，即所需变性→退火→延伸各自的温度和时间及循环次数的自动仪中进行反应，即可获得满意的扩增产物。

　　二、糖链抗原242检查过程

　　本法分三个步骤，即抗原与抗体反应、B和F分离和放射性测定。

　　1.抗原与抗体反应：将标本(非标记抗原)、标记抗原和抗血清顺序定量加入小试管内，置室温(15～30℃)作用24h，使其充分竞争结合。

　　2.B、F分离：分离技术多种多样，常用沉淀法。第二抗体沉淀法又称双抗体法，在受检抗原与第一抗体特异性反应后加入相应的第二抗体，使形成的抗原-第一抗体-第二抗体的复合物共沉，一经离心即可使结合标记抗原B与游离抗原F分离。本法是特异性沉淀，分离完全，非特异性结合力低。但第二抗体用量较大，成本较高。此外血清浓度、抗凝剂的有无因素可在一定程度上影响结果。聚乙二醇(PEG)沉淀法，使蛋白质处于等电点状态，水化层破坏而导致蛋白质沉淀。本法优点是PEG制备方便、价廉、分离快速，缺点是非特异沉淀物较多，分离不完全。第二抗体-聚乙二醇沉淀法，本法既有PEG法的快速沉淀优点，且保持第二抗体特异性沉淀的作用，又减少第二抗体用量，并降低PEG浓度，使非特异沉淀物减少。活性炭吸附法，利用活性炭表面活性将小分子的游离部分吸附。如在活性炭表面涂上一层葡聚糖，使它表面具有一定孔径的网眼，从而允许小分子游离抗原或半抗原逸入而被吸附，而大分子复合物则被排斥在外。在抗原与抗体反应后，加入葡聚糖-活性炭，放置5～10min，使游离抗原吸附在活性炭颗粒上，离心使颗粒沉淀，上清液中含有结合的标记抗原。

　　3.放射性强度测定：B和F分离后，即可测定其放射性强度。测量仪器有两类，包括液体闪烁计数仪(测β射线)和晶体闪烁计数仪(测γ射线)。计数单位是探测器输出的电脉冲数，单位为cpm(脉冲数/min)。

　　每次测定均需作一标准曲线图，以标准抗原的不同浓度为横坐标，以测到的相应放射性强度为纵坐标作图。放射性强度可任选B或F，亦可采用计算值B/B+F、B/F或B/B0。标本应作双份测定，取其平均值，在标准曲线上查出相应的受检抗原浓度。

来源资料：《国内实用外科杂志》 2003年 第6期

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