巨大的结肠新生儿期因乙酰胆碱酯酶活性较低，易出现假阴性结果;免疫组织化学方法准确性高，但因试剂昂贵，目前尚不适于做常规检查采用神经元特异性稀醇化酶(NSE)免疫组化法，检查32例怀疑巨大的结肠病儿无一例误诊，诊断先天性巨结肠，准确率达100%，NSE为神经节细胞内酶之一，是神经节细胞的标志，NSE抗体与神经节细胞及神经纤维内NSE结合，使神经组织清晰可见，发育未成熟的神经节细胞也容易辨认，并容易与炎性细胞，淋巴细胞，施万细胞，巨噬细胞和血管内皮细胞等区别。
巨大的结肠检查如下：
1.直肠肌层活检，最先采用该法，准确率为98%，从直肠壁取肌层活检，证实肌间神经节细胞缺如诊断先天性巨结肠，理论上是最可靠的方法，但因存在一些缺点，故目前并非必要。
①巨大的结肠经组织学检查发现，生后神经节细胞有一发育和成熟过程，直肠肌间丛尤其明显，黏膜下丛又落后几周，如不注意，可把正常儿诊断为巨大的结肠。
②正常直肠在齿状线上方有一低神经节细胞区，在该区内取材可把正常儿诊断为巨大的结肠，故强调取材高度在齿状线上方至少新生儿2cm，1岁以内2.5cm，1～3岁3cm，4岁以上3.5cm，如此，短段型巨结肠病儿又易漏诊，
③小儿肌层活检有肠穿孔，出血，感染等并发症，术后瘢痕可影响根治性手术，新生儿因肛管狭小，直肠壁薄，操作不便等，更易发生并发症。
另外，肌层活检是诊断先天性巨结肠同源病的主要根据。
2.直肠黏膜活检
直肠黏膜活检仅吸取一小块黏膜，经不断改进，该法简单，安全可靠，可不需麻醉，不必住院，检查方法有组织学，组织化学及免疫组织化学，组织学检查主要用HE染色判断神经丛中神经节细胞的有或无，该法简单，但不准确;乙酰胆碱酯酶等组织化学检查方法，需要新鲜组织标本和冷冻切片机等技术条件，新生儿期因乙酰胆碱酯酶活性较低，易出现假阴性结果;免疫组织化学方法准确性高，但因试剂昂贵，目前尚不适于做常规检查方法
3.X线钡剂灌肠
X线下钡剂灌肠是判定病变范围和选择术式的重要依据，钡剂灌肠目的是显示痉挛段及其上方的扩张段，因此确认扩张段即可，不要过多灌入钡剂继续向上检查，以免加重病儿腹胀及其危险。痉挛段范围在降结肠以下者，侧位显示最清，故一般仅摄带肛门标记的侧位X线片，但痉挛段达乙状结肠时从正位观察才能全面，X线钡剂灌肠的诊断率，目前仍徘徊在90%左右。
其原因主要有3个：
①新生儿巨结肠确诊困难，一般认为新生儿巨结肠的形态学改变，生后2周才形成，有的需要3～4周甚至几个月，尽管开展了灌肠后24～48h，动态观察钡剂贮留或排泄的功能性改变，但梗阻症状很重时，钡剂灌肠后必须洗肠或手术，不允许延迟观察;并发肠炎时，难于保留钡剂达24h以上。
②对短段型巨大的结肠，尤其是超短段型巨大的结肠，难与特发性巨结肠鉴别。
③对特殊型巨大的结肠易于漏诊或误诊。
4.直肠肛管测压，是诊断巨大的结肠的有效方法，具有经济，简便，快速而安全，以及无损伤性，可反复检测等优点，关于测压诊断巨大的结肠的准确率，文献报道不一(76%～100%)，研究证明，正常儿直肠内气囊注入2～3ml气体后，1～3s内肛管压力迅速下降(称正常反射)，而巨大的结肠病儿，向直肠内气囊注入很多气体，肛管压力都不变(称阴性反射)，即无直肠肛管反射或无正常反射，有的巨大的结肠病儿，肛管压力不但不下降，反而上升(称异常反 射)(图3)，阴性反射和异常反射统称为病理反射，经检测156例慢性便秘病儿，直肠肛管测压的准确率为93.33%，其中误诊率为2.88%(104例病理反射者，3例除外先天性巨结肠：2例为新生儿，6个月后复查正常;另1例为胎粪性腹膜炎)，漏诊率为7.69%(52例有正常反射者，4例为先天性巨结肠病儿)，为提高测压诊断的准确性，必须注意检查方法和判断标准。
来源资料：《中华消化内镜杂志》2002年第1期